La nueva técnica de secuenciación masiva (NGS) en tripanosomátidos. El ejemplo de Leishmania. por Vicente Larraga. Centro de Investigaciones Biológicas. CSIC. Madrid
Las nuevas técnicas de secuenciación masiva (NGS) están produciendo una mejora muy notable en la búsqueda de moléculas con posible valor preventivo de la infección en tripanosomátidos en general y en Leishmania en particular. La mejora técnica permite obtener secuencias de genomas completos en pocas horas que pueden ser interpretados en pocas semanas, gracias a los nuevos programas bioinformáticos. No obstante, no se trata solamente de una mejora en la rapidez en la obtención de secuencias de moléculas específicas del metabolismo del parásito, sino también de la especificidad de los análisis. Así, la secuenciación de ARN permite, utilizando cebadores específicos del mini-exón, detectar, gracias a la especificidad del trans-splicing y a la presencia de la secuencia del mini exón en todas ellas, aquellas moléculas que pertenecen al protozoo sobre otro tipo de moléculas, presentes como contaminantes, procedentes del huésped mamífero. Esta especificidad en la reacción de RNAseq está permitiendo detectar moléculas de Leishmania en muestras muy pequeñas obtenidas de preparaciones de pacientes, tanto humanos como animales, así como procedentes del vector flebótomo, hasta ahora imposibles de estudiar desde el punto de vista molecular. Esta tecnología permite también analizar cantidades mínimas de parasito en una preparación procedente de huéspedes con características clínico/biológicas específicas (casi un single cell detection). Ya sea con un tipo determinado de manifestación clínica o con una mayor sensibilidad o resistencia a una cepa del parásito. Este tipo de estudio está produciendo un avance notable en el conocimiento de los posibles mecanismos de la infección y permite la detección más rápida de posibles candidatos, tanto a moléculas protectoras vacunales como a dianas terapéuticas.
