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La cromatografía de afinidad basada en la interacción lectina-glicano se
describió en 1965 por Agrawal y Goldstein (Agrawal y Goldstein, 1965).
Inicialmente se utilizó un dextrano entrecruzado covalente como el
Sephadex G 200 que fija concanavalina A que posteriormente se eluye con
glucosa. Este procedimiento permite fijar específicamente la proteína
eliminando las que no lo hacen. El procedimento general se ha mejorado
sustituyendo los ligandos fijados covalentemente a las resinas soporte. Por
ejemplo, en el aislamiento de las lectinas de Sambucus se ha realizado de
dos formas, fetuina ligada a Sepahrosa 4B como soporte (grupo de
Peumans) y Sepharosa 6B tratada con ácido para liberar galactosas
terminales (nuestro grupo). En el primer caso solo se aislan las lectinas
específicas de ácido siálico, mientras que en el segundo se aislan además
las que son solo específicas de galactosa y N-Ac-galactosamina (Girbes y
cols., 2004).
DETECCIÓN DE PROTEÍNAS EN ELECTROFORESIS EN
GELES DE POLIACRILAMIDA DE GLICOPROTEÍNAS.
La electroforesis en geles de poliacrilamida de gliconjugados permite
separar las distintas especies en base a su peso molecular. La
transferencia a membranas apropiadas bien de forma pasiva o por
electrotransferencia y posterior detección con lectinas marcadas es una
nueva tecnología muy potente ya que permite determinar el tipo de
glicanos y posteriormente la aplicación de las técnicas proteómicas para
la identificación precisa de las secuencias de aminoácidos (Etxebarria y
cols., 2012).
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